目前是Cell & Molecular博班一年級學生,正在進行lab rotation。
第一次進到一個生化實驗室,也是第一次進到這麼自由奔放的實驗室QAQ
基本上這個rotation的主題是希望研究一種證實與代謝有關的G protein receptor dimerization與其功能的相關性。
需要使用nanodisc來抓住由cell free synthesis (using wheat germ system)產生的帶有不同螢光蛋白的GPCR monomer,
希望透過FRET來觀察他們dimerize的pattern。
FRET之所以可以被拿來應用在我們想探討的dimerization是因為當兩者夠近的時候,
比較低能量就能激發的那一方所釋放的能量才能傳遞給需要更多能量才能激發的另一方。
也因此看到兩種顏色都顯示在顯微鏡下時,
便代表著dimerization發生。
聽起來很酷吧(!?)
但是默默發現了實驗室管理的重要性。
另外,雖然學習到一些觀念,但默默的開始焦慮著沒有data QAQ
紀錄一下獲得:
1. 由文獻逐漸推導適合的材料方法。
2.修養修養還有修養
恩..如果要精簡的話大概是這樣XD
另外正經一點的是
RIPA比較適合哺乳動物細胞
最簡單的蛋白質萃取方式就是:
PBS+Lysozyme+PMSF (proteinase inhibitor)+液態氮/37度C重複三次 -->取上清液
PBST
NaCl | 8g |
KCl | 0.2g |
Na2HPO4 | 1.44g |
KH2PO4 | 0.24g |
補水至 1L | |
調整pH to 7.4 | |
Tween20 (Tween80 or Triton-100) | 1ml |
習得(?)技能
HPLC & Spectrometry
使用198X年機器,翻箱倒櫃找尋藥品的耐心(?)
看文獻看看看沒有實驗做又擔心rotation結束沒有data的沉住氣...
有些東西很久沒作還是要查查查啊...配方都給忘了....真要好好作紀錄才行呢!
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